红刺玫愈伤组织如何再生建立

1.试验方法。愈伤组织的诱导和继代增殖 将红刺玫无菌苗的叶柄、复叶、小叶片接种于愈伤诱导培养基［MS( 基本培养基) + 2. 5 mg/L 2，4-D( 2，4-二氯苯氧乙酸) ］上。叶片的暗培养时间分别设定为 7 d、14 d、21 d、28 d。继代增殖培养基成分同愈伤诱导培养基代写教师职称论文多少钱。将愈伤组织切成 3 mm 大小，接种于继代增殖培养基上，黑暗条件下培养，每 4 周继代一次。芽的诱导 将多次继代的愈伤组织转接于芽诱导培养基上，芽诱导培养基为 MS 培养基上添加不同浓度梯度的NAA( α-萘乙酸) 和 TDZ ( 噻重氮苯基脲) ，试验设定 4 个TDZ 浓度梯度，分别为 0. 50 mg / L、1. 00 mg / L、1. 50 mg / L、2. 00 mg / L，3 个 NAA 浓度分别为 0 mg / L、代写教师职称论文0. 05 mg / L、0. 10mg / L，每个处理 3 次重复。确定最合适的激素浓度后，将愈伤组织接种在确定为最合适于芽诱导的培养基上，经过暗培养 4 d、8 d、12 d、16 d 后进行光照培养( 45 d) ，每个重复统计25 个样本，确定芽诱导的最适合暗处理时间。诱导率 = 再生不定芽的愈伤数/接种愈伤总数 ×100%。苗的生根和移栽 将经过暗培养的绿苗在光照条件下培养至 5. 0 cm 高，切除愈伤组织后转入生根培养基［MS+ 0. 4 mg / L NAA］中进行生根培养。生根后炼苗3 ～ 4 d，移栽到湿润的泥炭土中。

2.愈伤组织的诱导和继代增殖通过对红刺玫叶柄、复叶、小叶片不同的外植体进行愈伤组织诱导发现，3 种外植体均可以在含有 2，4-D 的 MS 培养基上产生愈伤组织，但是形成愈伤组织的时间、数量、形态各有差异。叶柄在培养第 10 d 时切口膨大，第 15 d 时产生愈伤，愈伤直径 0. 8 cm，为白色湿泥状，褐化现象严重; 复叶在培养 6 ～7 d 时切口处膨大，第12 d 时产生愈伤，愈伤直径1. 0 c教师职称论文发表m，愈伤组织紧致淡黄色; 小叶片在培养第 4 d 时切口处膨大，第 7 d 时产生米粒大小的愈伤组织，直径 1. 5 cm，愈伤组织为白色湿泥状且松散。通过比较发现，小叶片是诱导愈伤组织的最佳外植体。对暗培养第 7 d、第 14 d、第 21 d、第 28 d 时的叶片进行观察发现，随着暗培养时间的增长，愈伤组织慢慢增多，第14 d 时愈伤组织直径达到 1. 0 cm。第 21 d 时，愈伤组织直径增至 1. 5 cm，呈白色湿泥状，较疏松。第 28 d 时，愈伤组织不再增殖，颜色渐黑，有胚状根形成。表明小叶片最佳暗培养时间为 21 d。将愈伤组织转接到继代增殖教师职称论文格式范文培养基上，第 7 d 时愈伤组织开始增殖，长出新的白色颗粒状的愈伤组织，28 d 时长到2. 0 cm，继代过程中愈伤组织是从白色湿泥状逐步变成白色、紧致的颗粒状。28 d 后，愈伤组织长出胚状根。表明愈伤组织诱导培养基同样适合愈伤组织的增殖，继代周期为28 d。

3.芽的诱导芽诱导是把愈伤组织转接到芽诱导培养基( MS 培养基上添加 TDZ 和 NAA) 上。试验结果显示，当 TDZ 浓度相同时，随着 NAA 浓度的增加，红刺玫芽的再生率也增加; 当NAA 浓度相同时，随着 TDZ 浓度的升高，其诱导率呈现先增多后减少的趋势。通过试验对比发现，当 TDZ 浓度为 1. 50mg / L且 NAA 浓度为 0. 05 mg / L时，芽诱导率达到最高值为48% 。表明最适合的红刺玫愈伤组织芽诱导培养基为 MS +1. 50 mg / L TDZ + 0. 05 mg / L NAA。将愈伤组织在 MS + 1. 50 mg/L TDZ + 0. 05 mg/L NAA培养基上分别暗培养 4 d、8 d、12 d、16 d 发现，暗培养第 4 d时的愈伤组织很难形成芽点; 暗培养第 8 d 时的愈伤组织出现一个或者几个绿色芽点，并逐渐分化出叶片和茎，最后长成幼苗; 暗培养第 12 d 和第 16 d 时形成的芽畸形，表现为叶片细长，叶片开展后卷曲，且芽出现白化的情况。表明芽诱导最适合的暗培养时间为 8 d。
苗的生根和移栽当苗长成 5 cm，切除愈伤组织后进行生根培养，结果表明，红刺玫苗在生根培养基上培养 30 d 后可生出3 ～6 条根，生根率为 90%，平均根数为 3. 8。随后移栽在湿润的泥炭土中生长良好。